準確測定有機化合物的分子結構，對從分子水平去認識物質世界，推動近代有機化學的發(fā)展是十分重要的。采用現(xiàn)代儀器分析方法，可以快速、準確地測定有機化合物的分子結構。在有機化學中應用最廣泛的測定分子結構的方法是四大光譜法：紫外光譜、紅外光譜、核磁共振和質譜。紫外和可見光譜(ultraviolet and visible spectrum)簡寫為UV。今天就一起來看看紫外的知識吧。
一、紫外分光光度計難點——校正方法
紫外分光光度計的校正方法：分光光度法的最重要的一個物理化學量是吸光度。為了獲得準確的研究結果，準確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關。偶然誤差影響測量的精密度，可通過足夠數(shù)量測量的統(tǒng)計處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測量結果的準確度，可在大體相同實驗條件下，用比較一種物質的準確測量結果，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來。而分光光度計的系統(tǒng)誤差(波長校正、分光光度計的慢散光、放大器的線性響應、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數(shù)、操作者的改變、使用物質的純度、稱量和濃度、pH)對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關于操作誤差，多數(shù)情況下，通過嚴格按操作程序測量、儀器調零、準確稱量等來控制或減少這種誤差的產生。關于儀器的系統(tǒng)誤差，可通過對分光光度計的定期校正來克服，若所需準確度很高的測量，則必須天天校正。
二、紫外分光光度計難點——讀數(shù)不穩(wěn)定
（一）先不放比色皿，看儀器是否漂移。如果不漂移，說明儀器正常。
（二）放入空白溶液比色皿調零，讀數(shù)漂移到一定數(shù)值后，取出比色皿看一下，內壁是否有極細小的氣泡。
一般紫外分光光度計讀數(shù)不穩(wěn)定的根本原因應該有兩類：一類是能量降低，信噪比下降，這個可能性比較大;另一類是信號接收和處理故障。
（一）能量降低
1、比色皿：如果是在400nm以下波長測量，需使用石英比色皿，假如使用普通玻璃比色皿會吸收大部分的紫外能量。還有比色皿一般有光面和毛面之分，毛面是手捏的，光面是對正光路的。
2、樣品架：檢查樣品架是否在正確的槽位上，光是否全部照在比色皿上。方法是把波長設定到550nm左右，這時是比較明亮的黃綠色光，在樣品室內用個小紙片擋下就能看到光斑。這個方法也能檢測可見區(qū)的光源是否正常，濾光盤及波長驅動是否正常。
3、空白樣品樣品室不放任何東西對空氣調零，看是否穩(wěn)定。如果穩(wěn)定的話，應該是空白樣品本身吸光度太高了。方法是先對空氣調零，然后把空白樣品放入光路中看讀數(shù)。如果讀數(shù)很大，例如接近3A，則不可用。
4、光源先確認分析波長值，一般紫外可見有2個光源，紫外區(qū)用氘燈，可見區(qū)用鎢燈，切換點一般在340nm-400nm。鎢燈光較為明亮刺眼，氘燈光偏青紫色。如果儀器后面有透光窗口可以直接看，如果沒有的話，需要打開外殼，打開燈室罩。光源都是用壽命的，能量變弱或干脆不亮了，要換燈。也有比較小的可能是光源供電電路故障，例如電源老化后可能導致無法正常點亮氘燈。
5、光路看光路是否偏了，可以把波長設定到550nm左右，觀察樣品室內有無黃綠色光線，光斑能否正確照在接收器窗口上。確認燈室內光源光斑是否正確照在單色器入狹縫上，確認光路中有無雜物擋住。確認單色器內反射鏡、透鏡、光柵、濾光片等是否發(fā)霉或積滿灰塵，這個需要廠家才能處理。
6、驅動電路故障例如濾光盤驅動異常，導致濾光片用錯或者干脆光路被遮擋。一般廠家或專業(yè)人員處理。
信號接收和處理故障接收器(例如光電池或者光電倍增管)、放大電路、AD轉換電路等都有可能。這類問題一般由廠家或專業(yè)人員處理
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